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ATCC細(xì)胞的培養(yǎng)與凍存及復(fù)蘇技巧
日期：2025-04-30 10:44
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摘要：
ATCC提供了多種類型的培養(yǎng)基，包括DMEM、RPMI-1640、F-10等。消費者在選擇培養(yǎng)基時，需要根據(jù)細(xì)胞株的特性進(jìn)行選擇。例如，很多腫瘤細(xì)胞株通常在DMEM培養(yǎng)基中生長良好，而**細(xì)胞則更適合在RPMI-1640中培養(yǎng)。此外，培養(yǎng)基中的高濃度糖類和氨基酸是維持細(xì)胞生命的關(guān)鍵。
ATCC細(xì)胞一般在37°C、5% CO2的環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)。確保培養(yǎng)箱的溫度和CO2濃度穩(wěn)定是至關(guān)重要的。過高或過低的溫度均會影響細(xì)胞的生長速度和形態(tài)，甚至導(dǎo)致細(xì)胞的死亡。此外，細(xì)胞在培養(yǎng)過程中需要適當(dāng)?shù)臐穸?，以防止培養(yǎng)基的蒸發(fā)帶來的濃度變化。
細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)中的重要環(huán)節(jié)，通過低溫保存可以延長細(xì)胞的使用時間，從而便于后續(xù)實驗的開展。在細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的過程中，掌握一些技巧是確保細(xì)胞成功存活的關(guān)鍵。
凍存前的準(zhǔn)備
在對細(xì)胞進(jìn)行凍存前，需要對細(xì)胞進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚怼ＭǔＧ闆r下，選擇對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行凍存效果最佳。此時，細(xì)胞增殖活躍，狀態(tài)良好，能夠提高凍存后的復(fù)蘇率。此外，使用適當(dāng)?shù)膬龃嬉海ɡ绾?0% DMSO和90%培養(yǎng)基的溶液）可以保護(hù)細(xì)胞在冷凍過程中的損傷。DMSO能夠有效降低細(xì)胞內(nèi)的冰晶形成，減少細(xì)胞損傷。
凍存過程中的注意事項
在凍存過程中，溫度的下降速率非常重要。細(xì)胞應(yīng)當(dāng)在-80°C下進(jìn)行初步冷凍，通常在4小時內(nèi)降到-80°C，隨后轉(zhuǎn)移至液氮中保存。需要強調(diào)的是，避免細(xì)胞在冷凍過程中遭受大于-130°C的沖擊，以防止細(xì)胞過度**。
復(fù)蘇后的處理
復(fù)蘇細(xì)胞時，應(yīng)從液氮中迅速取出細(xì)胞，立即置于37°C的水浴中解凍，時間控制在1-2分鐘內(nèi)，之后迅速轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基中，以洗去凍存液。洗滌是為去除DMSO，以防止其對細(xì)胞活性的影響。復(fù)蘇后的細(xì)胞應(yīng)當(dāng)置于適宜的培養(yǎng)環(huán)境中，并盡量減少光照，以促進(jìn)細(xì)胞恢復(fù)。
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